ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
Pasos para realizar un análisis microbiológico.
1.- Esterilización del material (trabajo en equipo).👩🏽⚕️👨🏽⚕️✔
Lista de materiales para este punto
1.1 Lava y seca al menos dos cajas de Petri por equipo, tápalas, enróllalas en papel destraza y sujétalas con cinta indicadora o con cinta adhesiva, no olvides etiquetar con los datos de tu equipo (con lápiz). Coloca la base de la caja Petri en la parte de abajo.
Lava y seca un matraz Erlenmeyer de 250 mL y tápalo con algodón y gasa como si fuera su tapón, cúbrelo como las cajas de Petri.
1.2 Coloca la las cajas de Petri y el matraz cubiertos con papel destraza en el autoclave por un tiempo entre 15- 30 minutos contando a partir de que empiece a salir el vapor por la válvula. Sugerencias para acelerar el calentamiento:
- Cerrar la válvula al inicio y después purgar.
- Prender la autoclave inmediatamente al iniciar la sesión, ya que tarda aproximadamente 45 minutos en alcanzar una buena temperatura.
 |
| Autoclave Vertical Manual EV-36, imagen obtenida de https://equiponovatech.com/producto/autoclave-vertical-manual-ev-36/ |
1.3 Después de que la autoclave no esté a gran temperatura (presión de 0) saca los materiales y colócalos en un lugar seco y seguro (la gaveta del laboratorio C102 sería buena opción).
2. Preparación del agar (preparación por grupo).👨🏽⚕️👩🏽⚕️🧴
 |
| Imagen obtenida dehttps://www.testmark.com.mx/Agar-dextrosa-y-papa-450g,993_38 |
2.1 Agrega con la espátula de acero inoxidable la cantidad que sugiera la etiqueta a un vaso de pp de 500 mL, del mismo modo agrega la cantidad de agua que se indique. Sugerencia, la etiqueta te sugiere preparar 1L de solución, sin embargo, se puede usar para 500 mL, haciendo los cálculos con regla de tres.
2.2 Agrega agua destilada a temperatura 🌡 ambiente y mezcla con un agitador de vidrio.
2.3 Si no disuelve bien el soluto, lleva el vaso de pp. que contiene la solución sobre un tripie y tela de alambre con asbesto a fuego y sigue mezclando hasta disolución completa.
2.4 Prepara una solución de NaOH diluida y otra de HCl también diluida.
2.5 Ajusta el pH como indique la etiqueta del frasco del Agar.
Nota. Para tener un agar de calidad cuida lo siguiente:
- agregar la cantidad exacta de soluto como de solvente
- no mantengas mucho tiempo tu solución a alta temperatura
- ajusta correctamente el pH indicado con tus soluciones de NaOH y HCl
3.Esterilización del agar.♨🌡👩🏽⚕️👨🏽⚕️
3.1 Vacía toda la solución anterior al matraz Ernelmeyer, coloca nuevamente un tapón de algodón y gasa; en este caso no es necesario cubrir con papel.
3.2 Mete el matraz Erlenmeyer tapado al autoclave el tiempo que indique la etiqueta del Agar.
3.3 Mete el matraz en el refrigerador.
4. Preparación del área de trabajo estéril (trabajo en equipo).🚯😷
4.01 A partir de este momento:
- todo el grupo debe usar cubrebocas,
- habla lo menos posible para evitar contaminar el área,
- las personas con pelo largo deben amarrarlo,
- usar guantes y desecharlos, pero de preferencia no usar guantes, en su caso lavar bien las manos con agua y jabón o desinfectante sin alcohol.
4.1 Para tener el área de trabajo limpia usa una de las siguientes opciones:
- Descontamina el área de trabajo con etanol,
- Descontamina el área simplemente con una franela húmeda,
- Coloca una base de papel destraza o papel bond sobre la mesa.
4.2 Enciende el mechero Bunsen y ajústalos hasta que produzca una llama azul viva.
Sugerencia: Usa dos mecheros por equipo para tener una mejor área estéril, y trabajarás entre los dos mecheros. Ten cuidado de no quemarte, de preferencia usa el asa hacia arriba para que no te queme si tu mano se encuentra arriba.
4.3 Trabaja con tus materiales de trabajo en esta área y evita corrientes de aire que interrumpan tu área.
5. Llenado de las cajas con el Agar.🍶
5.1 Saca el Agar del refrigerador, ponlo a baño María (por grupo), ahí estará a la consistencia deseada después de unos 40 minutos aproximadamente.
5.2 En el área de trabajo estéril llena al menos dos cajas de Petri por equipo con el agar hasta una altura aproximada de unos 5mm (medio centímetro); ten cuidado de no pasarte de más🙀 o de agregar muy poco😕, en el primer caso tendrías un exceso y no podrías trabajar bien ni podrías manipular, el segundo caso no tendrías un buen medio de cultivo.
5.3 Tapa las cajas de Petri en esta misma área estéril (entre los mecheros Bunsen).
5.3 Sella las cajas con masking tape y etiqueta tus cajas con los datos de tu equipo y fecha de elaboración.
5.4 Saca las cajas de Petri cerradas y ponlas a enfriar, puede ser en un refrigerador a una temperatura aproximada de 5°C.
6. Sembrado de la muestra.🕳🍕🍔🍟🥖🌮🥪🥙🥗🍩🥛🥤
Nota: El agar papa dextrosa sirve para aislar hongos y levaduras a partir de
- muestras de alimentos,
- derivados de la leche,
- productos cosméticos.
Dentro de los microorganismos que se tienen buenos crecimientos son:
- Saccharomyces cerevisiae,
- Candida albicans,
- Aspergillus brasiliensis DSM
6.1 Divide con el asa bacteriológica el área de la caja de Petri en cuatro áreas para colocar cuatro muestras diferentes.
6.2 Raspa con el asa de cultivo las muestras propuestas (comida preparada en los puestos de la calle), teniendo cuidado de desinfectar el porta asa a fuego directo cada vez que cambies de muestras.
6.2 Siembra el medio de cultivo en forma de zigzag en el área asignada. Sugerencia, realiza tus trazos de forma que identifiques cuál es el trazo para determinada muestra.
Para mayor detalle de cómo hacer esta maniobra consulta la página 72 de tus copias engargoladas Siembra por agotamiento en caja Petri.
Como ejemplos se comparte el siguiente vídeo: Técnicas de siembra en Medios de cultivo: Por Agotamiento. Observa y pon atención a los siguientes puntos:
- El giro de la caja de Petri,
- El área de trabajo libre de contaminación (fuego),
- El uso de guanes de látex,
 |
| Imagen tomada de https://www.google.com/url?sa=i&url=http%3A%2F%2Fmicrobiologia3bequipo5.blogspot.com%2F2014%2F10%2Ftecnicas-y-metodos-de-estriado-en-caja.html&psig=AOvVaw1g8rztRHmIW4EHtxodzsbX&ust=1686445197407000&source=images&cd=vfe&ved=2ahUKEwidp9WIwLf_AhWFwckDHcC6D0MQr4kDegUIARDHAQ |
7. Incubación y crecimiento.⏱🗓📈🦠🦠🦠🦠🙀
7.1 Sella tus cajas de Petri con masking tape de forma circular y escribe tus datos.
7.2 Lleva tu caja de Petri a incubación en la Incubadora (34° aproximadamente) el tiempo necesario (aproximadamente de 24-48 h).
7.4 Deja tus muestras en el refrigerador para mejor crecimiento.
8. Observación.🧐🔬🦠
8.1 Observa el crecimiento de hongos o levaduras a simple vista o con un microscopio estereoscópico directamente sin necesidad de usar porta objetos y cubre objetos. Si no te dan este tipo de microscopio, si necesitarás el porta objetos y el cubre objetos.
Nota: para mejorar las observaciones usa la lámpara de tu teléfono celular en vez de la luz que sale del microscopio. 🔬🧫💡🔦
8.2. Cuantificación de colonias de hongos y levaduras.
Cuenta cuántas colonias se formaron ya sea de hongos o levaduras.
8.3 Realiza tus observaciones en la bitácora.
9. Desechamiento. ☣⚠🚮
Lista de materiales para este punto por equipo:
- 1 autoclave
- 1 piseta
9.1 Colocar las cajas de Petri en el Autoclave. Coloca la base abajo y la tapa arriba ☝️. Enciende la autoclave como en el punto 1. Usa cubrebocas y guantes.
9.2 Coloca los desechos en una bolsa y coloca en la basura 🚮 orgánica. Usa cubrebocas y guantes.
9.3 Lava con agua 💧 y jabón, enjuaga con agua destilada. Usa cubrebocas y guantes.
9.4 Entrega el material.
Fin 🦠👀
